КЗ «Дніпропетровське клінічне об’єднання швидкої медичної допомоги» ДОР» консультативно-діагностичний центр
вул. В. Антоновича, 65, Дніпро, 49006, Україна
PI “Dnipropetrovsk Clinical Association of Emergecy Medical Care”
Сonsultative and diagnostic center
V. Antovovycha str., 65, Dnipro, 49006, Ukraine e-mail: el.kor.allergy@gmail.com
Ключові слова: поліноз, алергоспецифічна імунотерапія, діалізат лейкоцитів ліофілізованого (Імодину)
Key words: pollinosis, allergen-specific immunotherapy, dialysate leukocyte lyophilized
Реферат. Динамика уровня цитокинов под влиянием диализата лейкоцитов лиофилизированного (Иммодина) на фоне аллергоспецифической иммунотерапии (АСИТ) пыльцевыми аллергенами у больных поллинозом. Корецкая Е.В. Проведен анализ IL-4, INF-γ под влиянием диализата лейкоцитов лиофилизированного (Иммодина) на фоне АСИТ пыльцевыми аллергенами у больных поллинозом. Обследовано 104 человека обоего пола, страдающих поллинозом, средний возраст составил 34,3±1,0 год. Все пациенты ранее получали АСИТ. Показано, что до начала лечения у половины больных поллинозом (n=58 (55,8±4,9)%) уровень IL-4 в крови превышал норму. Уровень IFN-γ в сыворотке крови, напротив, был пониженным и выходил за пределы референтного интервала. После предсезонной АСИТ на фоне диализата лейкоцитов лиофилизированного (Иммодин) отмечалось существенное снижение содержания в сыворотке крови IL-4 по сравнению с исходным уровнем – в 1,7 раза, или на 40,2% (p<0,001). Содержание IL-4 в сыворотке крови пациентов основной группы после лечения было на 32,0% ниже, чем у пациентов группы контроля (p<0,001). Уровень IFN-γ повысился в 2,4 раза у пациентов основной группы и в 1,9 раза – в группе контроля. Итак, на фоне сопоставимых уровней INF-γ к лечению в обеих группах, под влиянием АСИТ в основной группе его кон- центрация в сыворотке крови стала на 33,9% больше, чем в контрольной. Результаты исследования показали, что АСИТ влияет на ингибиторы Th2, инактивируя его активность, однако на фоне Иммодина это происходит достоверно эффективнее уже после первого курса.
Abstract. Dynamics of cytokines level under the influence of lyophilized dialysate of leucocytes (Immodin) on the background of allergen-specific immunotherapy (ASIT) by pollene allergens in patients with pollinosis. Koretskaia Ye. The analysis of IL-4, INF-γ has been performed on the background of lyophilized dialysate of leucocytes (Immodin) in the course of the ASIT with pollen allergens among patients with pollinosis. 104 people of both gen- ders were examined, average age was 34.3±1.0 years. All patients took the ASIT course before. It is denoted that prior to treatment half of the patients with hay fever (n=58 (55.8±4.9)%) had blood IL-4 level above the norm. The level of INF-γ in blood serum, in contrast, was lower and beyond the reference range. After preseasonal ASIT under the influence of lyophilized dialysate of leukocyte (Immodin) a significant decrease of IL-4 content in blood serum comparing to initial level – by 1.7 times or 40.2% (p<0.001) is observed. IL-4 content in blood serum of the main group after treatment was lower by 32.0%, comparing to the control group (p<0.001). IFN-γ level increased by 2.4 times among patients of the main group and by 1,9 times among patients of the control group. Hence, in presence of comparable levels of INF-γ before treatment in both groups, under the influence of ASIT the INF-γ concentration in blood serum in the main group is 33.9% higher than in control group. Studies indicate that ASIT effects on Th2 inhibitors, disenabling its activity, although under the influence of Immodin it proceeds reliably more efficiently already after the first course.
В останні роки поліноз представляє велику медичну та соціальну проблему людства. За да- ними різних дослідників, поширеність полінозу в Україні становить до 10% [2].
Поліноз характеризується підвищеною здатністю В-лімфоцитів синтезувати IgE, який у свою чергу взаємодіє з FcɛR1-рецепторами базофілів і тучних клітин, що призводить до вивіль- нення біологічно активних речовин (гістаміну, прозапальних цитокінів і хемокінів), які індукують розвиток алергічного запалення. При по- траплянні алергенів в організм відбувається активація Т-лімфоцитів (Тл), які синтезують цитокіни, характерних для Th2. Розвиток імунної відповіді з переважним синтезом антитіл класу IgE регулюється Тл, шляхом синтезу і секреції IL-4, IL-5 і IL-13 [6, 7, 10].
Вважається, що обидва типи Т-хелперів утворюються з Тh0. Перехід Тh0 в Th1 опосеред- кований IFN-γ та ІL-12, а Th2 утворюється під впливом IL-4.
IL-4 (В-клітинний стимулюючий фактор) у здорових людей не визначається і з’являється тільки при активації реакцій імунної системи за типом розвитку Th2, який здійснює гуморальний імунітет. Дисрегуляція секреції IL-4 є ключовою у розвитку атопічних захворювань. Спостерігається кореляція між IL-4 і рівнем IgE. Основна функція IL-4 складається в перемиканні синтезу IgG1 на синтез IgG4 і IgE. Інтерлейкін-4 є антагоністом гамма-інтерферону (IFN-γ) [3, 4, 5, 8, 9].
Гамма-інтерферон продукується Th1-клітина- ми і ЕК-клітинами. Th1 здійснює хелперну функцію у формуванні клітинного імунітету. Оцінка його рівня має значення для визначення поляризації імунної відповіді за типом активації Th1 [1, 11].
Основним методом лікування полінозу, який впливає на всі ланки патогенезу, залишається алергоспеціфічна імунотерапія (АСІТ). На жаль, сталий ефект від проведення АСІТ настає, як правило, після проведення 3-5-річного курсу лікування [2].
Імуномодулюючий ефект Імодину реалізується за рахунок: здатності прискорювати проліферацію, дозрівання і диференціацію попередників імунокомпетентних клітин; стимулювання експресії рецепторів цитокінів; стимулювання реакції клітин імунної системи на міжклітинні молекулярні сигнали; стимуляції функцій фагоцитів (кисеньзалежний метаболізм, мікробіцидна активність), а також підвищення продукції гамма-інтерферону, інтерлейкіну-1 та інтерлейкіну-2 з наступною нормалізацією співвідношення субпопуляцій Т-лімфоцитів Тh1 на Тh2 на користь з Тh1фенотипом.
У зв’язку з вищевикладеним, метою цього дослідження було вивчення динаміки показників цитокінового профілю у хворих на поліноз під впливом специфічної імунотерапії пилковими алергенами (АСІТ) на тлі діалізату лейкоцитів ліофілізованого (Імодину) і без нього.
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
У дослідженні взяли участь 104 хворих на поліноз. Вік пацієнтів коливався від 19 до 57 років, середній вік становив (M±m) 34,3±1,0 рік, що відповідає віковій структурі алергічних захворювань в Україні. Серед 104 пацієнтів було 57 (54,8%) чоловіків та 47 (45,2%) жінок. Тривалість захворювання на поліноз (від моменту постановки діагнозу) коливалася від 1 до 38 ро- ків і в середньому становила 9,59±0,77 року.
Пацієнти були розподілені на 2 групи. Перша група (основна) – 62 пацієнти (59,6%) отримували АСІТ на тлі діалізату лейкоцитів ліофілізованого (Імодину), друга група (контрольна) – 42 пацієнти (40,4%) отримували АСІТ. Всі пацієнти раніше не отримували АСІТ.
Для виявлення причинно-значущих алергенів всім хворим виконано шкірні проби методом prik-тестів зі стандартними пилковими алерге- нами виробництва ТОВ «Імунолог» (м. Вінниця,
Україна). Дослідження проводились у період ре- місії полінозу (з листопада по березень).
Всім пацієнтам була проведена передсезонна АСІТ причинно-значущими алергенами. Для цього використовували водно-сольові розчини алергенів (у 1 мл розчину – 10000 PNU алергену) виробництва ТОВ «Імунолог» (м. Вінниця, Україна).
Пацієнтам основної групи паралельно з АСІТ вводився діалізат лейкоцитів ліофілізованого (Імодин) за схемою (табл. 1).
Схема введення діалізату лейкоцитів ліофілізованого (Імодин)
Таблиця 1
Схема введення діалізату лейкоцитів ліофілізованого (Імодин)
| Термін прийому | Доза | Спосіб застосування |
| 1 тиждень | 1 доза лікарського засобу (вміст однієї ампули) відповідає кількості діючої речовини, що міститься в 200 млн лейкоцитів донора. | Підшкірно |
| 2 тиждень | Підшкірно | |
| 3 тиждень | Приготування розчину: ліофілізований лікарський засіб розчиняють безпосередньо перед використанням у 4 мл води для ін’єкцій. | Підшкірно |
| 7 тиждень | Підшкірно |
У всіх хворих визначався рівень IL-4, IFN-γ у сироватці крові до і після курсу АСІТ.
Статистичну обробку результатів дослідження проводили з використанням ліцензованого програмного продукту STATISTICAv.6.1®. З урахуванням закону розподілу кількісних даних (критерії Колмогорова-Смирнова і Лілієфорса) використовували параметричні і непараметричні характеристики й методи порівняння: у випадках нормального закону розподілу – середню арифметичну та її стандартну похибку (М±m), 95% довірчий інтервал (95% ДІ), критерії Стьюдента
Для незв’язаних і зв’язаних (t) вибірок, в інших випадках – медіану (Ме) та квартилі (25-75%), критерії Манна-Уїтні (U) і Вілкоксона (Т). Ін- тенсивні показники представлені як % і стандартна похибка (М±m), порівняння проводили за критерієм Хі-квадрат Пірсона (2). Статистично значущим вважалось значення p<0,05 (5%). Обидві групи були статистично порівняними за віком і статтю пацієнтів, а також за тривалістю захворювання (р>0,05 для всіх випадків порівняння) (табл. 2).
Таблиця 2
Загальна характеристика хворих на поліноз
| Стать (абс. ч./%) | Стаж захворювання, років (M±m) | ||||||||
| Група | Вік, років (M±m) | ||||||||
| чол. | жін. | ||||||||
| Основна група (n=62) | 32,9±1,2 | 35/ 56,5 | 27/43,5 | 9,83±1,00 | |||||
| Контрольна (n=42) | 36,5±1,6 | 22/ 52,4 | 20/47,6 | 9,24±1,20 | |||||
Примітка : р>0,05 для всіх випадків порівняння між групами.
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
Результати дослідження показали, що до початку лікування в половини хворих на поліноз (n=58; (55,8±4,9)%) рівень IL-4 у крові перевищував норму (0-4,0 пг/мл), у тому числі в 32 (51,6±6,3%) пацієнтів основної групи і в 26 (61,9±7,5%) – у контрольній групі (р>0,05). Рівень IFN-γ у сироватці крові, навпаки, був зниженим і виходив за межі референсного інтервалу (2,0-15,0 пг/мл) у 16 (25,8±5,6%) і 11 (26,2±6,8%) пацієнтів з основної і контрольної груп відповідно (р>0,05).
У динаміці спостереження після передсезонної АСІТ на тлі діалізату лейкоцитів ліофілізованого (Імодин) (табл. 3) відзначається вірогідне зниження вмісту в сироватці крові IL-4 (р<0,001) та підвищення продукції IFN-γ (p<0,001). Ці дані переконливо свідчать про позитивний вплив АСІТ на тлі діалізату лейкоцитів ліофілізованого на цитокіновий профіль хворих на поліноз і перемикання відповіді з Th2 на Th1-клітини.
Таблиця 3
Динаміка цитокінів у хворих на поліноз під впливом АСІТ на тлі діалізату лейкоцитів ліофілізованого (Імодин) (основна група) (n=62)
| Середній рівень: M±m або Me [25-75%] | (р) у динаміці за критерієм | ||||
| Показник | Референтні інтервали | ||||
| до лікування | після лікування | Стьюдента | Вілкоксона | ||
| IL-4, пг/мл | 0-4,0 | 4,05±0,21 | 2,42±0,17 | <0,001 | <0,001 |
| INF- γ, пг/мл | 2,0-15,0 | 3,67 | 8,65 | <0,001 | <0,001 |
| [1,99-6,54] | [4,29-17,50] | ||||
Результати відповідного дослідження показа- ли, що у хворих на поліноз після парентеральної АСІТ на тлі Імодину відзначалося істотне зниження вмісту в сироватці крові IЛ-4 порівняно з вихідним рівнем – в 1,7 разу, або на 40,2% (p<0,001), що відповідає початку алергічного за- палення та вказує на еозинофільну інфільтрацію тканини (рис. 1). Аналогічні зміни рівня IЛ-4 у пацієнтів контрольної групи були менш вираженими – середній показник зменшився в 1,3 разу, або на 21,8% (p<0,05) (табл. 4, рис. 1). Як наслідок – вміст IЛ-4 в сироватці крові пацієнтів основної групи після лікування був на 32,0% нижчим, ніж у пацієнтів групи контролю (p<0,001). Таким чином, одержані нами дані підтверджують більш виражену інгібіцію активності Th2-клітин під час проведення АСІТ на тлі Імодину.
П р и м і т к и : 1 – дослідження – до лікування, 2 – дослідження – після лікування, вказано зміни показника (рази) порівняно з 1-м дослідженням, * – p<0,05; ** – p<0,001 відносно показника в основній групі.
Рис. 1. Динаміка середніх рівнів цитокинів під впливом АСІТ в основній і контрольній групах
Таблиця 4
Динаміка цитокінів у хворих на поліноз під впливом АСІТ (контрольна група) (n=42)
| Середній рівень: M±m або Me [25-75%] | (р) у динаміці за критерієм | ||||
| Показник | Референтні інтервали | ||||
| до лікування | після лікування | Стьюдента | Вілкоксона | ||
| IL-4, пг/мл | 0-4,0 | 4,55±0,30 | 3,56±0,21 | 0,012 | 0,035 |
| INF- γ, пг/мл | 2,0-15,0 | 3,48 | 6,46 | 0,003 | <0,1 |
| [1,97-5,40] | [3,82-8,81] | ||||
Про підвищення активності Th1-клітин після проведення передсезонної АСІТ свідчить позитивна динаміка продукції INF-γ. Так, його рівень підвищився в 2,4 разу в пацієнтів основної групи (р<0,001) і в 1,9 разу – у групі контролю (р<0,001) (рис. 1). Отже, на тлі зіставних рівнів INF-γ до лікування в обох групах (р>0,05), під впливом АСІТ в основній групі його концентрація у сироватці крові стала на 33,9% більше, ніж у контрольній (р<0,05).
Таким чином, результати дослідження показали, що АСІТ впливає на інгібітори Th2, інактивуючи його активність, проте на тлі Імодину це відбувається достовірно ефективніше вже після першого курсу, що відрізняється від даних, раніше представлених у літературі.
ВИСНОВКИ
- Визначено виражену інгібуючу дію діалізату лейкоцитів ліофілізованого (Імодину) на активність Th2-клітин після першого курсу АСІТ пилковими алергенами, що виявлялось зниженням продукції IЛ-4 на 40,2% порівняно з вихідним рівнем і на 32,0% відносно пацієнтів контрольної групи (p<0,001).
- Підвищення в 2,4 разу продукції INF-γ з одночасним суттєвим зниженням рівня сироваткового IЛ-4 (р<0,001) підтверджує здатність застосування препарату Імодин вже після першого курсу АСІТ пилковими алергенами перемикати імунну відповідь з Th2 на Th1.
- При застосуванні препарату Імодин не спостерігалося будь-яких побічних реакцій протягом всього курсу АСІТ.
- Комбінація АСІТ пилковими алергенами на тлі Імодину є ефективним методом патогенетичного лікування хворих на поліноз.
СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ
- Демьянов А.В. Диагностическая ценность исследования уровней цитокинов в клинической практике / А.В. Демьянов, А.Ю. Котов, А.С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. – 2003. – T. 2, № 3. – C. 20-35.
- Дитятковська Є.М. Алергічний риніт, епідеміологія, патогенез, дiагностика, лiкування / Є.М. Дитятковська, I.B. Гогунська, В.О. Дитятковський. – Київ: Вістка, 2014. – 208с.
- Долгих В.Т. Основы иммунологии / В.Т. Дол- гих. – Москва: Медицинская книга, 2000. – 201 с.
- Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология / Г.Н. Дранник. – Одесса: АстроПринт, 1999. – 603 с.
- Паттерсон Р. Аллергические болезни (диагностика и лечение) / Р. Паттерсон, Л. Грэмер, П. Гринберг. – Москва: Гэотар, 2000. – 734 с.
- Хаитов Р.М Иммунотерапия (руководство для врачей) / Р.М. Хаитов, Р.И. Атауллаханова. – Москва: Гэотар. – 2014. – 670 с.
- Foley S. Inflammatory patterns in allergic rhnitis / S. Foley, Q. Hamid // Clin. Ехр. Allergy Rev. – 2006. – P. 91-99.
- Cytokine profile of bronchoalveolar lavage- derived CD4(+), CD8(+), and у8 Т cells in people with asthma after segmental allergen challenge / N. Krug, V. Erpenbeck, К. Balke [et аl.] // Am. Respir. Cell. Mol. Biol. – 2001. – Vol. 25. – P. 125-131.
- O’Rourke F. Тhе role of CD8 in cytotoxic Т lymphocyte function / F. O’Rourke, М. Mescher // Immunol. Today. – 1993. – Vol. 14. – Р. 183-188.
- Thomson А. The Cytokine Handook. – London: Acad. Press, 1992. – 418р.
- Hurlock E.C. Interferons: potential role in effects / E.C. Hurlock // Med. Hypothes. – 2001. – N 5. – Р. 558-566.
REFERENCES
- Demyanov AV, Kotov AYu, Simbirtsev AS. [Diagnostic value of the study of cytokine levels in clinical practice]. 2003;2(3):20-35. Russian.
- Dytiatkovska YM, Hohunska IV, Dytiatkov- skyi VO. [Allergic rhinitis, Epidemiology, pathogenesis, diagnosis, treatment]. Kyiv, Vistka. 2014;1-208. Ukrainian.
- Dolgih VT. [Fundamentals of Immunology]. Me- ditsinskaya kniga. 2000;201. Russian.
- Drannik GN. [Clinical Immunology and Allergology]. AstroPrint. 1999;603. Russian.
- Patterson R, Gremer L, Grinberg P. [Allergic diseases (diagnosis and treatment)]. Geotar. 2000;734. Russian.
- Haitov RM, Ataullahanova RI. [Immunotherapy (guide for doctors)]. Geota». 2014;670. Russian.
- Foley S, Hamid Q. Inflammatory patterns in allergic rhinitis Clin. Ехр. Allergy Rev. 2006;91-99.
- Krug N, Erpenbeck V, Balke К, et аl. Cytokine profile of bronchoalveolar lavage-derived CD4(+), CD8(+), and у8 Т cells in people with asthma after segmental allergen challenge. Am. Respir. Cell. Mol.
Biol. 2001;25:125-31. - O’Rourke F, Mescher М. Тhе role of CD8 in cy- totoxic Т lymphocyte function. Immunology Today. 1993;14:183-8.
- Thomson А. (Ed.) The Cytokine Handook. Lon- don: Acad. Press, 1992;418.
- Hurlock EC. Interferons: potential role in effects Med. Hypothes. 2001;5:558-66.